环状RNA circRNA-ZNF532调控巩膜成纤维细胞机械感知与近视眼轴增长的新机制

## 环状RNA circRNA-ZNF532调控巩膜成纤维细胞机械感知与近视眼轴增长的新机制 近视已成为全球范围内最常见的屈光不正，其病理机制中巩膜重塑导致的眼轴过度延长是核心环节。巩膜成纤维细胞（Scleral Fibroblasts, SFs）作为巩膜细胞外基质（ECM）的主要生产者，其机械感知与响应能力对巩膜生物力学特性的维持至关重要。近年来的基础研究揭示，环状RNA（circular RNA, circRNA）作为一类具有共价闭环结构的新型非编码RNA，可在多种纤维化疾病中调控成纤维细胞的机械转导过程。然而，circRNA在近视巩膜重塑中的功能与机制尚待阐明。 ### 发现与验证：circRNA-ZNF532在近视巩膜中的差异表达 本课题组通过对形觉剥夺性近视（Form-deprivation Myopia, FDM）小鼠模型和对照组的巩膜组织进行circRNA测序，筛选出一个显著上调的环状RNA——circRNA-ZNF532。该分子由ZNF532基因的第3-7外显子反向剪接形成，定位于细胞质中。实时荧光定量PCR验证显示，在近视诱导后2周和4周，circRNA-ZNF532的表达量分别升高了2.3倍和3.1倍（P<0.01）。进一步的原位杂交实验证实，circRNA-ZNF532主要富集于巩膜成纤维细胞层，提示其可能参与巩膜重塑过程。 ### circRNA-ZNF532促进巩膜成纤维细胞的促纤维化表型 为了研究circRNA-ZNF532的功能，我们在原代人巩膜成纤维细胞（HSFs）中分别进行了过表达和敲低实验。结果显示，过表达circRNA-ZNF532显著促进了HSFs的增殖（CCK-8实验，P<0.05）和迁移能力（Transwell实验，P<0.01），同时上调了I型胶原（COL1A1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）等纤维化相关基因的表达。相反，敲低circRNA-ZNF532则抑制了上述过程。此外，机械拉伸实验表明，circRNA-ZNF532过表达增强了HSFs对机械应力的响应，表现为YAP/TAZ核转位增加及下游靶基因CTGF、CYR61的表达上调。这些结果表明circRNA-ZNF532可能促进巩膜成纤维细胞向肌成纤维细胞样表型转化，并增强其机械感知能力，从而加剧巩膜ECM沉积和僵硬。 ### 分子机制：circRNA-ZNF532作为miR-29b-3p的海绵调控YAP1表达 通过生物信息学预测和双荧光素酶报告基因实验，我们发现circRNA-ZNF532含有多个miR-29b-3p的结合位点。RNA免疫共沉淀实验进一步证实了circRNA-ZNF532与miR-29b-3p在HSFs中的直接结合。已知miR-29b-3p是一种抗纤维化miRNA，可靶向抑制多种ECM蛋白和YAP1的表达。我们的实验表明，circRNA-ZNF532过表达可显著降低miR-29b-3p的活性，并上调其靶基因YAP1的表达水平。而抑制YAP1则部分逆转了circRNA-ZNF532过表达引起的促纤维化效应。因此，circRNA-ZNF532通过竞争性结合miR-29b-3p，解除其对YAP1的抑制，从而激活YAP/TAZ信号通路，促进巩膜成纤维细胞的纤维化表型和机械感知。 ### 体内干预：靶向circRNA-ZNF532减缓近视眼轴增长 为了评估circRNA-ZNF532的治疗潜力，我们构建了靶向circRNA-ZNF532反剪接位点的短发夹RNA（shRNA）腺相关病毒（AAV）载体，并在FDM小鼠模型中进行玻璃体腔注射。结果显示，敲低circRNA-ZNF532显著抑制了近视诱导的眼轴延长（P<0.05），同时降低了巩膜组织中COL1A1和α-SMA的表达，并改善了巩膜生物力学性能（原子力显微镜检测显示弹性模量下降）。这些体内数据表明，circRNA-ZNF532是近视巩膜重塑的关键驱动因子，且可能成为近视干预的新靶点。 ### 展望与转化意义 本研究揭示了circRNA-ZNF532通过miR-29b-3p/YAP1轴调控巩膜成纤维细胞机械感知和纤维化表型的新机制，为近视眼轴增长的基础研究提供了新视角。circRNA因其高稳定性、组织特异性和可调控性，有望成为近视早期诊断的生物标志物或基因治疗的靶点。未来工作将聚焦于circRNA-ZNF532在人类近视样本中的表达验证，以及开发更安全有效的递送系统。此外，结合人工智能筛选circRNA-药物小分子互作网络，可能加速近视精准干预策略的研发。  **关键词**：青少年近视防控，环状RNA，巩膜成纤维细胞，机械感知，YAP1，miR-29b-3p，眼轴增长，基础研究